水平电泳槽跑电泳实验需要注意哪些事项

用电安全核心要点
严格遵守‌先接线、后通电，先断电、后开盖‌的操作原则，全程禁止湿手触碰电极、缓冲液和电源接口。
电极正负极必须对应：红色电极接电源红色正极，黑色电极接黑色负极，核酸样品带负电，会向正极方向迁移，接反会导致样品反向跑出胶外。
实验全程不能无人值守，若出现槽体异常发热、电流骤降等问题，第一时间关闭电源排查故障，严禁通电状态下伸手进槽内调整样品。
制胶关键注意事项
琼脂糖加热溶解时，锥形瓶需盖带小孔的保鲜膜，用微波炉中高火加热，中途取出轻晃避免暴沸溢出，确保溶液完全澄清无颗粒。
待凝胶冷却至‌50~60℃‌（手感不烫手）再倒胶，提前垂直插好加样梳，梳齿底部距胶盒底保持1~2mm距离，避免后续加样漏液。
室温静置20~30分钟，待凝胶完全凝固后再垂直拔出梳子，防止加样孔变形、断裂，影响后续上样操作。
缓冲液与上样规范
制胶用的缓冲液和电泳槽内的缓冲液必须完全一致（如均为1×TAE或1×TBE），禁止直接用50×浓缩液稀释不足就上机，否则离子强度过高会导致凝胶过热融化。
缓冲液液面需没过凝胶表面‌1~2mm‌，保证电流均匀传导，液面过低会导致局部电场不均，条带严重歪斜。
上样前样品需和上样缓冲液按比例混匀，单孔上样量控制在5~15μL，用移液枪枪头垂直对准加样孔缓慢注入，避免戳破孔底或样品溢出造成交叉污染。
电泳运行参数控制
常规琼脂糖电泳按凝胶长度计算电压，控制在‌5~10V/cm‌，比如10cm长的凝胶设置50~100V即可，电压过高会快速产热，导致条带拖尾、凝胶融化。
观察溴酚蓝指示剂迁移位置，当指示剂走到凝胶2/3处时即可停止电泳，避免小分子核酸跑出胶外，导致目标条带丢失。
同时接多台电泳槽时，所有槽体要同步通电启动，避免不同槽体间电场互相干扰，影响分离一致性。
后续防护与设备维护
溴化乙锭（EB）是强诱变致癌物质，操作时必须全程戴手套，所有接触过EB的凝胶、枪头、废液要单独收集，做无害化处理后再丢弃。
实验结束后先关闭电源，再拔出电极插头，用蒸馏水彻底冲洗槽体、铂电极和制胶托盘，擦干后在干燥通风处收纳，避免残留缓冲液长期腐蚀电极。
后续凝胶成像观察时，佩戴专用防护面罩，避免紫外线直接照射皮肤和眼睛，防止造成不可逆损伤。