北京六一生物技术有限公司
一、最适合的样品类型
1. 各种 DNA 样品
这是水平电泳槽最核心的用途:
表格
样品类型 典型用途 凝胶浓度参考
PCR 产物 验证扩增是否成功、判断片段大小 1%~2% 琼脂糖
酶切产物 限制性内切酶消化后的 DNA 片段 0.8%~1.5%
质粒 DNA 检测质粒纯度、看超螺旋/开环/线性构型 0.8%~1%
基因组 DNA 提取完整性检测、纯度评估 0.6%~0.8%(低浓度胶)
DNA Marker / Ladder 作为分子量标准,估算样品大小 —
cDNA 反转录产物检测 1%~2%
DNA 回收纯化 切胶回收目的条带 根据片段大小选择
2. RNA 样品
需在无 RNase 环境下进行,常用变性琼脂糖凝胶:
总 RNA 完整性检测(看 28S/18S 条带比例)
mRNA 大小分布分析
Northern 杂交的第一步分离
变性胶常用:甲醛变性胶、MOPS 缓冲体系
3. 寡核苷酸 / 小片段核酸
引物、探针等短链核酸的质量检测
需用高浓度琼脂糖(3%~4%)或聚丙烯酰胺凝胶(但小胶可用水平槽跑)
小片段(<100bp)分辨率有限,更小的推荐用垂直 PAGE
二、可兼顾但不是首选的样品
小分子蛋白(特殊情况)
某些琼脂糖凝胶电泳可用于分离大分子蛋白复合物(如脂蛋白、血红蛋白),但非常少见
常规蛋白样品(如 SDS-PAGE)应使用垂直电泳槽,不建议用水平槽替代
三、绝对不适合水平电泳槽的样品
常规 SDS-PAGE 蛋白电泳——必须用垂直板电泳(不连续缓冲体系、需要浓缩胶)
蛋白质双向电泳(2-DE)——专用设备
毛细管电泳——专用毛细管设备
脉冲场电泳(PFGE)——虽然也是水平槽原理,但需要专用的脉冲场电泳仪(普通水平槽不能产生交变电场),用于分离超大片段 DNA(>50kb,如染色体、BAC 文库)
四、为什么核酸适合用水平电泳?
琼脂糖凝胶制备简单——加热融化后浇胶,冷却即可用,无需聚合等待
水平浸没式电泳——凝胶完全浸在缓冲液中,散热均匀,适合较长时间跑胶
核酸带负电——在 pH 中性的缓冲液中向正极迁移,直接按分子量大小分离
凝胶浓度可调范围大——0.3%~4%,分离范围从几百 bp 到几十万 bp 都能覆盖
回收方便——切胶后用试剂盒即可回收纯化目的 DNA 片段
五、快速选择指南
表格
你要跑的样品 选哪种电泳槽
DNA / RNA / 质粒 / PCR 产物 ✅ 水平电泳槽(琼脂糖)
蛋白(SDS-PAGE、Western blot 制胶) ❌ 用垂直电泳槽
超大 DNA 片段(染色体、100kb+) ❌ 用脉冲场电泳仪
回收 DNA 片段 ✅ 水平电泳槽(切胶回收)
快速核酸检测(菌落 PCR、提质粒快检) ✅ 水平电泳槽(小胶 + 快速跑)