紫外可见光分光光度计的使用（二）

    分光光度计的使用：在了解基本原理的基础上，分光光度计的使用主要从以下几个方面着手：

   光源和波长的选择：根据所测定的物质的性质，选择合适的光源和波长。一般在可见光范 围选择钨灯，紫外选择氘灯，但现在也有的紫外可见分光光度计在设计上已取消光源选择，只要一打开机器，两种光源都打开。初学者常犯的错误是忽视波长的选择，教学中常遇到的事情是学生把样品测完了才发现波长选错了，究其原因是没有检查波长设置。因此，在教学中，我 们经常强调使用分光光度计时，第一步是打开电源，第二步就是检查波长。如果是继续别人后使用仪器，则第一步就是检查波长。

   样品测定：用于分光光度计测定样品物质含量的基本原理是，样品在一定波长下光吸收值 的大小与样品中该物质浓度成正比。而最好的线性关系是在光吸收值为0.3 ～0.7时。因此，测定前要经过预实验确定合适的样品浓度，让反应后的待测溶液的光吸收值位于这个范围内。否则，待测数据不能正确反映实际变化。学生常有的一个 区是光吸收超过1.0以上时，将待测液稀释后测定。 实验数据表明，这种做法是不正确的，样品稀释应该在反应前而不应在反应后。

   如果不同样品之间浓度差异较大，则在测定时应先测定低浓度(浅色 )，再定测高浓度(深色)，这样可以避免反复洗比色杯。不仅节省时间，还可以避免洗杯后润洗所造成的误差。为 了减少比色杯的光吸收误差，除了测定前校正比色杯外，可以在测定中平行样品间使用同一个比色杯测定。

   当分光光度计使用时，每次测定样品时应先用对照校正零点(机器和光吸收)，然后再将待测样品拉人光路进行测定。 实际操作时也可以只校正光吸收零点，当光吸收零点出现较大误差时，再全部校正。因为分光光度法是以物质光吸收作为设计基础的，一般测定时常以蒸馏水等作为参照调正仪器的零点和光吸收的零点。测定样品得到的光吸收值减去空白管光吸收值，再 去计算含量。 但实际上，比较以空白管代替蒸馏水管来调仪器的零点和光吸收零点，所测得的光吸收值和一般操作所测定的光吸收值是一样的。但这样做的结果不仅简便了实验操作，而且 消除了试剂本身的光吸收值。