UV法和HPLC法测定合成色素诱惑红的比较

近年来屡屡出现在食品中非法添加合成色素事件，合成色素日益成为影响食品安全的一个重要因素。这类色素的合成要经过磺化、硝化、卤化、偶氮化一系列化学反应， 大多对人体

有一定危害作用， 偶氮类合成色素更具有致癌性。我国对于苋菜红、胭脂红、诱惑红、日落黄、柠檬黄、亮蓝、靛蓝这几类合成色素在食品中的使用有着严格的限量。诱惑红是偶氮类化合物， 因此准确测定食品中的诱惑红对于食品安全有着重要意义。

   目前测定诱惑红的标准有高效液相色谱法、紫外可见分光光度计法、示波极谱法等。常用的是高效液相色谱法和紫外可见分光光度计法，本文研究两种方法的优劣，以期找到可以高效准确测定诱惑红的检测方法。

   主要仪器：

   高效液相色谱仪(配有紫外检测器; 色谱柱: C18 250mm×4.6mm粒度5μm)

   紫外可见分光光度计（上海光谱仪器有限公司）

   分析天平(精确到 0.0001g) （上海菁海仪器有限公司）

   离心机、实验室用水均为超纯水。

   人工合成色素诱惑红标准溶液，聚酰胺粉，乙醇－氨溶液，甲醇－甲酸溶液，柠檬酸溶液，乙酸，甲醇(色谱纯)，乙酸铵。

   液相色谱条件：流速: 1.0 mL/min；柱温:30℃；进样量:10μL；梯度:甲醇20%～35%，3% /min；35%～98%，9%/min；98%～98%，继续6min；检测波长:254nm；流动相:甲醇－乙酸铵溶液

(0.02mol/L)。

   高效液相色谱法：将水果味糖果粉碎准确称取10g，加30mL乙醇－氨溶液溶解，水浴浓缩至 20 mL，加20%柠檬酸调节pH3.5～4.5，加热至70℃，加0.8g聚酰胺粉，充分搅拌，用20%柠檬酸调节pH3.5～4.5，加入少量水，使色素完全吸附。3000r/min离心3min。以乙醇－氨溶液解析， 加乙酸中和，定容至 100mL。经0.45μm滤膜过滤后，吸取10μL进样。

   紫外可见分光光度计法：将水果味糖果粉碎准确称取10g，加30mL温水溶液溶解，用柠檬酸调节至pH4，加0.8g聚酰胺粉，充分搅拌，使色素完全吸附。热水洗去糖等物质。并用甲醇 － 甲酸溶液洗三次，去除天然色素。再用70℃ 水洗至滤液为中性。然后用乙醇－氨溶液将合成色素解析下来。于水浴上驱除氨，将溶液蒸至2 mL，用50% 的乙醇溶液定容至5mL。

   从结果的可信度来看， 高效液相色谱法加标浓度在300μg/g时，平均回收率为98.3%，符合《SN/T1743－2006食品中诱惑红、酸性红、亮蓝、日落黄的含量检测 高效液相色谱法》中的回收率要求；紫外可见分光光度计法的两个相差最大的平行试样测定结果( 即0.0311和0.285) 的绝对差值是算术平均值的8.7%符合《GB/T5009.141－2003食品中诱惑红的测定》的要求。

   从精密度来看， 高效液相色谱法的六个平行试样测定结果的 RSD=0.7% ，紫外可见分光光度计法的六个平行试样测定结果的 RSD=4.1%，可见此实验中高效液相色谱法的精密度明显高于紫外可见分光光度计法。

   从方法的灵敏度来看，高效液相色谱法的检出限是2.5mg/kg；紫外可见分光光度计法的取样量为10g时，检出限是25mg/kg。可见高效液相色谱法的灵敏度明显低紫外可见分光光度计法。

   由上述可以得出，在检测糖果中合成色素诱惑红含量时，高效液相色谱法优于紫外可见分光光度计法。