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血红蛋白电泳筛查常见地中海贫血

[导读]比较 HbA2 或 HbA2 联合平均红细胞体积( MCV) 、平均红细胞血红蛋白含量( MCH) 筛查常见 地中海贫血的敏感性、特异性的差异。

目前临床上仍然缺乏治疗地中海贫血( 简称 地贫) 的有效手段。因此,通过合理选择和正确 使用实验室检查项目和方法进行地贫的筛查和确 诊,进而防止重症地贫患儿的出生是控制该病的 最经济有效的措施[1]。 地贫的实验室常规诊断项目( 或称筛查试验)主要为血液学检查,包括红细胞参数测定、红细胞 渗透脆性试验、血红蛋白组分分析、血清铁代谢检 查等,大量的报道集中在红细胞平均体积( mean corpuscular volume,MCV) 、红细胞脆性及血红蛋白 电泳联合检测在地贫诊断中的价值[2-3]。MCV 和 平均红细胞血红蛋白含量( mean corpuscularhemoglobin,MCH) 都是良好的指标,如果 MCH < 27 pg 和/或 MCV <80 fL时,就应高度怀疑为地贫, 建议进一步做血红蛋白分析[4-5]。我们回顾了几年 的患者资料,发现以 MCH 联合血红蛋白电泳筛查 地贫较 MCV 联合血红蛋白电泳筛查更敏感,临床 应用更可靠。为了简化诊断策略、合理选择检测项 目,正确分析和解释检验结果,我们比较了 MCV 或 MCH 联合血红蛋白电泳筛查常见地贫类型的敏感 性、特异性、阳性预测值和阴性预测值。 


材料和方法 

一、研究对象 2011 年7 月至2013 年 8 月在沙井人民医院 门诊、住院及体检者中通过基因检测确诊为地贫 和非地贫患者共903 例,包括β-地贫275 例、 α-复 合 β-地贫44 例、 α-地贫186 例、非地贫398 例,其 中男132 例,女771 例,年龄2 ~54 岁。样本分布 与国内外文献报道一致[6-8]。 

二、标本采集及保存 采用真空采血管( 深圳美瑞公司) 抽静脉血2 mL 于紫头管中,乙二胺四乙酸二钾( ethylene diamine tetreacetic acid-K2,EDTA-K2) 抗凝,颠倒 混匀8 次备用。红细胞参数在4 h 内完成测定,其 余项目在3 d 内完成。标本保存于2 ~8℃冰箱内。 

三、方法 采用SYSMEX XE-2100 血液分析仪( 日本希森 美康公司) 及配套试剂检测 MCV 和 MCH,质控液 为原装配套。采用 CAPILLARYS 2 电泳仪( 法国 Sebia 公司) 及配套试剂进行血红蛋白电泳,质控液 为原装配套。地贫的基因诊断由广州金域医学检验中心进行。α-珠蛋白基因分析采用跨越断裂点 聚合酶链反应( gap-polymerase chain reaction,gapPCR) , 检测3 种常见缺失。β-珠蛋白基因分析采 用 PCR 结合反向斑点杂交法,检测17 个常见突变 位点。 

四、质控 XE-2100 血液分析仪及 CAPILLARYS 2 电泳 仪均确认质控在控后进行检测。本实验室( 编码: 114112) 参加卫生部临检中心室间质评结果满意。 

五、判定标准 红细胞参数: MCV < 80 fL,MCH ﹤ 27 pg[9]。 血红蛋白电泳 Hb A2 值标准为本实验室结合Sebi 公司提供的标准拟定( 年龄 2 岁以上者) 。( 1) HbA2 >4. 0%且血红蛋白组份正常:与 β-地贫、 α合并 β-地贫相关; ( 2) HbA2≥3. 0%且有 HbE 区 带:与 βE 位点突变导致的 β-地贫相关( 包括 α合并 βE 位点突变) ; ( 3) HbA2 为 2. 5% ~ 4. 0% 且血红蛋白组份正常: 正常人群; ( 4) 1. 0% < HbA2 <2. 5%且血红蛋白组份正常: 与 α-地贫、 δ地贫、缺铁性贫血相关; ( 5) HbA2 ≤2. 0% 且有 HbH 和 Bart's 区带:与 α-地贫( HbH 病) 相关。 六、统计学方法 采用 SPSS 17. 0 软件进行统计分析。计算 MCV 或 MCH 联合血红蛋白电泳筛查常见类型地 贫的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值。

 结 果 

一、基因检测结果 505 例地贫的基因检测结果见表1。样本分 布与国内外文献报道[8-9, 11]接近。

、血红蛋白电泳检测结果 见表2。 三、红细胞参数检测结果 β-地贫和 α-复合 β-地贫的血红蛋白电泳结 果显示HbA2 均≥4. 0%,所以把β-地贫和α-复合 β-地贫合并为一组计算。见表3。 四、HbA2、MCV、MCH 单独或联合筛查地贫 的敏感度、特异性、阳性预测值和阴性预测值血红蛋白电泳( HbA2) 可以筛查出 95%以上 的β-地贫和α-复合β-地贫。MCV 联合HbA2 筛查 α-地贫的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测 值分别为 85. 56%、83. 26%、57. 30% 和95.98%; MCH 联合 HbA2 筛查 α-地贫的敏感性、特异性、阳 性预测值和阴性预测值分别为92.47%、81. 45%、 56. 39%和97. 66%。见表4、表5。


讨 论 

毛细管电泳综合了高效液相色谱和凝胶电泳的共同优点,具有快速、高效、高灵敏度、易定、重 现性好等优点[11-12],能有效地分离和准确定量 HbA、HbF、HbE、HbA2、HbCS、HbH 和 HbBart' s。

从表4 可以看出,血红蛋白电泳可以筛查出95% 以上的 β-地贫和 α-复合 β-地贫,但筛查 α-地贫 的敏感性和特异性均相对较低,因此需联合其它 项目进行筛查。 地贫属于小细胞低色素性贫血,血液学参数改 变主要以 MCV、MCH 降低为特征,但 MCV、MCH 的降低还见于缺铁性贫血、慢性病贫血、环形铁粒 幼细胞性贫血、铅中毒等。本研究由基因检测确诊 的398 例非地贫中有 120 例 MCV < 80 fL,133 例 MCH <27 pg,我们认为不剔除这部分贫血患者标 本更符合临床病例分布,更能反应采用 HbA2 联合 MCV 或 MCH 筛查地贫的实际意义。 地贫是单基因遗传性疾病, α-珠蛋白基因簇 定位于16 号染色体16p13. 3 位点, β-珠蛋白基因 簇定位于11 号染色体 11p15. 3 位点[13]。α-地贫 由于 α 珠蛋白链合成部分或完全受抑制,发生不 同程度的缺失和缺陷[14-15]。因此,不同类型 α-地 贫患者的贫血程度差异明显,大多数患者 MCV 和 MCH 同时降低,有少数轻度贫血患者只有 MCH <27 pg 或 MCV < 80 fL。从表 5 可以看出,以 MCV <80 fL 或 MCH < 27 pg 筛查 α-地贫,MCV 的敏感性为86. 56%,MCH 的敏感性为 92. 47%。 β-地贫大多数呈现小细胞低色素轻度贫血表现, MCV 和 MCH 的表现较为一致。而 α-复合 β-地 贫由于 α 链-和 β 链相对不平衡,比单一的 α-地 贫或 β-地贫的贫血程度有所减轻,红细胞参数的 表现与单纯的 β-地贫无明显差异,MCV 和 MCH 的表现也较为一致。 应用 MCV 与血红蛋白电泳( HbA2) 联合筛查 α-地贫可以提高敏感性和特异性。从表5 可以发 现以 MCH 联合血红蛋白电泳( HbA2) 筛查 α-地 贫较 MCV 联合血红蛋白电泳( HbA2) 更敏感,敏 感性从86. 56%提升到92. 47%。对于筛查项目, 应选择敏感性高者,可以减少漏诊病例。 作为常规筛查项目,本研究除外部分异常血 红蛋白病和相对比例较少的 α-突变基因类型,着 重于临床常见类型的地贫资料分析。β-地贫或 α-复合 β-地贫则一定要通过基因筛查来诊断。 地贫的基因突变检测技术是诊断的金标准[10]。 综上所述,血红蛋白电泳可以筛查出95%以 上的 β-地贫或 α-复合 β-地贫,MCH 联合血红蛋 白电泳筛查 α-地贫可以提高筛查的敏感性。







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